广州东盛生物科技有限公司
Guangzhou Dongsheng Biotech Co., Ltd.
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HS Taq DNA聚合酶
PCR/RT-PCR >> PCR试剂

品牌: 东盛
产地: 广州
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包装与价格:
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P1081250 U80
P1082500 U150
P10831,000 U270
P108418,000 U4000
品牌:东盛
产地:广州
产品介绍

产品组分

 P1071
 HSTM  Taq DNA聚合酶 5 U/μl 50 μl
 10×HSTM  PCR缓冲液(Mg2+ Plus) 1.4 ml
 6×上样缓冲液 1 ml
 P1072
 HSTM  Taq DNA聚合酶 5 U/μl 100 μl
 10×HSTM  PCR缓冲液(Mg2+ Plus) 1.4 ml
 6×上样缓冲液 1 ml
 P1073
 HSTM Taq DNA聚合酶 5 U/μl 200 μl
 10×HSTM  PCR缓冲液(Mg2+ Plus) 1.4 ml×2
 6×上样缓冲液 1 ml
 P1074
 HSTM  Taq DNA聚合酶 5 U/μl 100 μl×18
 6×上样缓冲液 1 ml

注:1、HSTM Taq DNA聚合酶分为2.5 U/μl与5 U/μl两种包装,可自由选择,如没特别说明提供5 U/μl的包装。
    2、10×PCR 缓冲液分为Mg2+ Plus与Mg2+ Free两种包装,可方便选择。如没特别说明提供Mg2+ Plus缓冲液。Mg2+ Free的 10×PCR 缓冲液提供25 mM MgCl2
    3、电泳时,请按每5 μlPCR反应液中加入1μl的比例添加6×上样缓冲液  混合后进行电泳。
 
保存条件
    -20℃保存2年。多次冻融不影响生物学活性。
 
产品说明
    HSTM Taq DNA聚合酶(High Specificity Taq DNA polymerase)是针对普通 Taq DNA聚合酶灵敏度高,易产生非特异性条带的情况,专门研制的高特异性嗜热DNA聚合酶产品。本产品的反应缓冲液的离子种类和浓度都经过改良,使得引物与模板的特异性结合力显著增强,从而提高引物与模板结合的严谨性,减少非特异性扩增。实验数据证明。 HSTM TaqDNA聚合酶能显著提高PCR扩增的特异性,降低背景,又能对长片段有较高的扩增效率。

产品特点
    热稳定性好:95℃下半衰期超过40 min。
    PCR产物具有3'-dA,可直接用于T/A克隆。
    扩增特异性高。
 
产品用途
    常规PCR扩增
    DNA标记
    DNA测序
    制备TA克隆用PCR产物
 
活性定义
    一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。
 
质量控制
    相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置一周,扩增活性无明显改变。
 
10×PCR缓冲液
  500 mM KCl
  100 mM Tris-Cl
  15 mM MgCl2
  1% Triton-100
 
酶贮存液
  20mM Tris-HCl
  1mM DTT
  0.1mM EDTA
  100mM KCl
  50 % Glycerol
  1% Triton-100
 
应用举例
注:以下反应举例为50 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。
 
以λDNA为模板,扩增1kb片段。

 λ DNA(2.5 ng/μl) 1 μl      
 引物1 (10 μM) 2 μl
 引物2 (10 μM) 2 μl
 10×PCR 缓冲液 5 μl
 dNTP混合物(2.5 mM) 4 μl
 HSTM Taq(5 U/μl) 0.25 μl
 超纯水 补足至50 μl

 
PCR反应条件

 95℃ 3 min
 95℃ 30 sec
 55~68℃ 30 sec  30 Cycles
 72℃ 1 min
 72℃ 10 min

 
注意事项
    1、HSTM Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3'末端通常会加上1个多余的腺嘌呤。
    2、碱基出错率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。HSTM Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5
    3、建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果。
    4、模板DNA推荐用量(50 μl 标准PCR体系)

 人类基因组DNA 0.1 μg ---1 μg
 λDNA 0.5 ng---5 ng
 质粒DNA 0.1 ng-10 ng
 大肠杆菌DNA 10 ng-100 ng

    5、如进行PCR扩增后,除目的条带外,还伴随其他杂带,建议适当减少体系中的Taq酶用量,以增加PCR扩增反应的特异性。
 
问:如何利用HSTM Taq DNA聚合酶进行加A反应?
答:由高保真DNA 聚合酶(如Pfu)产生的PCR 扩增片段的纯化产物1-7μl;
    加入1μl HSTM Taq DNA 聚合酶10×反应缓冲液(含MgCl2);
    加入dATP 至终浓度0.2 mM;
    加入5 U的HSTM Taq DNA 聚合酶;
    加超纯水至终反应体积为10μl;
    70℃孵育15-30 分钟;
    进行TA克隆。

 

广州东盛生物科技有限公司    地址:广州市天河区燕岭路89号燕侨大厦609
联系人:销售部   电话:020-87791356 87648545   传真号码:020-87791381
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